实验十三 DNA片段的连接技术
一、目的与原理
DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作，掌握这一DNA片段的连接技术。
二、材料和方法
1． 仪器
离心机，恒温设备，真空干燥机，取液器
2． 试剂
T4DNA连接酶，10×T4DNA连接酶缓冲液、200mM Tris-HCl(pH7.6)、50mM MgCl2、50mM DTT、500μg/ml牛血清白蛋白、5mM ATP、λDNA、酚，TE缓冲液，电泳缓冲液、3M NaAc
三、操作步骤
取干净、灭菌新Eppendorf管，按下表加入各试液
试液 体积（μl）
T4DNA连接酶缓冲液 1.5
λDNA 10
ATP 1
无菌水 1.5
连接酶 1
总体积 15
19–20℃ 保温2小时，提取已连接好的DNA片段。电泳分析。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 该实验用的T4DNA连接酶最适反应是37℃，但该温度下DNA退火效率低，连接效率还不如22℃高。
2、 如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效，可重新连接酶切后的λDNA。若连接成功，则说明有效。
实验十四 受体菌感受态细胞的制备
一、目的与原理
当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。
二、材料和方法
1． 材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2． 仪器：
离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
3． 试剂
LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴
TFB：10Mm MES（pH6.3）
45Mm MnCl2
10Mm CaCl2
10Mm KCl
三、操作步骤
大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)在LB培养基平板上划线培养12-16小时，挑取单菌落于LB培养基摇瓶培养大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)到对数期。取1ml培养物7000rpm，离心3min，收集菌体。再重复一次。冰浴放置。用预冷的氯化镁悬浮菌体7000rpm离心3min。收集菌体，冰浴放置。用预冷的氯化钙悬浮菌体，冰浴15min, 7000rpm离心3min。收集菌体，冰浴放置。加入200μl预冷的氯化钙（或TFB），放置于冰浴，即得感受态细胞，此细胞可现用，也可进行下步操作。将悬液分装于无菌离心管中，投入液氮，然后储于-70℃保存。
四、结果 （略）
五、注意事项
一般地，新制备的感受态细胞48h后转化效率降低，15d后失效。因此，感受态细胞不能保存太久，4℃保存一周，但-80℃可保存1年。用试管分装可避免反复冻熔，损伤感受态细胞。
实验十五 重组片段的转化及克隆和筛选
一、目的与原理
转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。
二、材料和方法
1.材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2.仪器：
离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
3.试剂
LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ;
TFB：10mM MES（pH 6.3）,45mM MnCl2, 10mM CaCl2, 100mM KCl
三、操作步骤
1. 感受态细胞融化（在手心）
2. 加入溶于TE的待转化外源DNA，冰浴30min。
3. 42℃热冲击2 min。
4. 冰上2min。
5. 加入0.4 ml LB液体培养基，37℃保温摇床45 min
6. 取0.2ml菌悬液涂布在含氨苄青霉素、IPTG、X-gal培养基上，37℃培养。
四、实验结果及分析：
培养皿上有白色菌落和兰 色菌落，但兰色菌落数量很少。由于受体细胞本身的菌落为兰色，所以白色菌落说明转化成功；兰色应为转化不成功。但是由于转化的质粒经过了酶切和连接，若是在原酶切位点的连接进行的转化，菌落为白色；若为酶切去一段DNA的的连接质粒进行的转化，菌落为兰色（说明在酶切上成功，连接上也成功，转化上也成功）。
五、注意事项
关键要严格控制热激时间，超过2min，则转化会失败。
免疫学实验
实验十六 单向琼脂扩散实验
一、原理
单向琼脂扩散实验又称单向免疫扩散实验。指可溶性抗原在相应抗体的琼脂介质中的扩散，可定性、定量抗原。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.取15ml琼脂糖加到56℃预热玻璃管中，加入约200微升抗血清，充分混匀后铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。
3.待凝胶凝固后打孔，直径为3㎜，将孔内琼脂弄出。
4.将系列稀释的标准抗原和待检抗原分别加到凝胶孔内，每孔5微升。
将凝胶板置于湿盒内，室温过夜，观察结果。
三、实验结果
发现沉淀环的大小与抗原的浓度成反比，基本成线性相关。其大小不仅与孔中抗原的浓度相关，而且和琼脂中抗体的浓度有关。
实验十七 双向琼脂扩散实验
一、原理
双向琼脂扩散实验，是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散,当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时,就会形成抗原抗体复合物的沉淀。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。
3.打孔，孔距为4㎜，
4.将抗血清按二倍稀释法稀释成1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32的不同浓度。
在周围孔中加入不同浓度的抗体，中心孔加抗原。
将凝胶板置于湿盒内，室温过夜，观察结果
三、实验结果
浓度不同，形成不同的沉淀的线。
实验十八 免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
3.在孔内加入抗原，其中一孔内加电泳指示剂。
4.将凝胶板放在电泳槽中进行电泳，确定电泳时间。
5.电泳后在凝胶板上沿电泳方向平行挖2㎜宽的长槽，加入抗血清。
二、实验结果
将凝胶板放入湿盒，室温放置12小时，可观察在到沉淀弧线。
实验十九 对流免疫电泳
一、操作步骤
1．1％琼脂糖融化后，置于56℃备用。
2．取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，凉干。
3．将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
4．在孔内分别加入抗原和抗体，每孔5微升，抗体点阳极，抗原点阴极。
5．在电场中电泳50min，5V。
二、实验结果
在小孔中间出现沉淀线。
实验二十 火箭免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台。
3％琼脂糖融化后，置于56℃备用。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
3.将抗原按倍比稀释，在孔内分别加入标准抗原和代测样品，每孔5微升。
在10V电场中电泳3小时。
二、实验结果
发现在电泳方向上有拖尾，拖尾长度与抗原浓度有关。
实验七 SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定
实验七 SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定
一、实验目的与原理
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
本实验的目的是对多酚氧化酶的纯化度鉴定及分子量的测定，通过实验，学习和掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质纯度和分子量的鉴定。
二、仪器与试剂
1．材料：
硫酸铵盐析沉淀的多酚氧化酶粗酶样品、DEAE-纤维素DE52柱层析的样品，Sephadex G-100柱层析的样品。
2．试剂：
（1）丙稀酰胺(Acr母液)：30％Acr （Acr/Bis）
（2）10％的SDS溶液
（3）10％的过硫酸铵溶液
（4）四甲基乙二胺（TEMED）
（5）分离胶缓冲液：1.5M Tris,PH8.8
（6）浓缩胶缓冲液：1.0M Tris,PH6.8
（7）电极缓冲液：10×30g Tris,125g 甘氨酸和5g SDS，加水溶解定容至1000ml,pH8.3
（8）样品缓冲液：0.2M Tris,PH6.8,1%SDS,30%甘油，巯基乙醇及溴酚兰
（9）染色液：0.15％考马斯亮蓝R250，溶于脱色液
（10）脱色液：50％的甲醇，7％的冰醋酸的水溶液
（11）标准分子量蛋白。
3．仪器设备：
电泳仪，垂直电泳槽等。
三、操作步骤
1, 凝胶制备：
用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。将配制好的分离胶溶液，倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。
2, 上样：
分别取样品若干ml于离心管中，按1/1-1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3－5min，取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30ul不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后，调节电泳仪电流到10mA（2－3mA/em），保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1－2cm时，即可停止电泳。
3, 染色：
电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 SDS与蛋白质的结合按质量成比例（即：1.4gSDS/g蛋白质），如果比例不当，就不能得到准确的数据。
2、 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。
3、 有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。
4、 有的蛋白质（如：电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质）不能采用该法测相对分子量。
5、 如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象，可能是SDS不纯引起。
实验八 Western bloting 技术
一、实验目的与原理
Western bloting技术是用来检测蛋白表达的特定的灵敏的方法，由蛋白质的SDS-PAGE、电转及杂交几部分组成。杂交技术主要有NC膜封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗和二抗的反应，显色等组成。将凝胶上的蛋白质转移到NC膜上，用其他蛋白作为封闭液，将膜上余下的其他蛋白结合位点封闭，加入与检测蛋白特异性的第一抗体，经免疫反应，一抗与靶蛋白结合，经洗膜液洗涤后，膜上仅在靶蛋白上结合抗体。在加入与第一抗体有免疫特异性的二抗，使之与一抗反应，反应后，经洗膜液洗涤，二抗仅存在于结合靶蛋白的一抗上。因为这种二抗都为酶标抗体，通过酶标反应，在显色液中，膜上结合靶蛋白—一抗—二抗的位置即将呈现一定的颜色。
二、材料与方法
1.材料
从微生物细胞中提取的多酚氧化酶（PPO）：10μl，20μl
NC膜：硝酸纤维素膜
2.仪器：
电转移槽，电泳仪，塑料封口机，摇床
3.试剂：
转移缓冲液：48Mm Tris,39mM甘氨酸，0.037%SDS同时加入20%乙醇。
封闭液与稀释液：PBS（牛血清白蛋白）
辣根过氧化物酶显色液：现配现用
三、操作步骤
1.SDS-PAGE电泳见上个实验
2.电转
⑴剪NC膜大小、滤纸与凝胶板一致，浸泡在转移缓冲液中5min。
⑵在转移装置中依次将三层滤纸、凝胶、滤纸、三层滤纸放在一起。
⑶将装好的转移装置放入电转移槽中NC膜一侧向正极，凝胶一面向负极。
⑷接通电源电压63V，电流90mA,转移过夜。
⑸转移结束后，取出装置，依次取掉各层，用铅笔在膜的上沿做标记，切下其中一个孔所对应膜的一半。
⑹NC膜的封闭：将NC膜放入一塑料袋中，加入封闭液3ml，封口，轻轻震荡2h。
⑺将封闭好的NC膜放入另一塑料袋中，加入用封闭液稀释的一抗，2.8ml，封口。4℃下轻摇2h。
⑻洗膜：弃去反应液，用一抗稀释液洗三次，每次10min。
将膜从PBS中取出转至150mM氯化钠，50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min。
⑼将二抗用二抗稀释液稀释，将NC膜放入塑料袋中，加入二抗溶液2.8ml。封口，轻轻震荡1h。
⑽洗膜：取出膜转至150mM氯化钠，50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min，三次。
⑾将膜放入显色液中，室温轻轻摇动，10min。
⑿待条带出现后，立刻用水洗膜，然后转入PBS中，观察记录。
实验九 等电聚焦电泳（IEF）分离蛋白及测定蛋白质等电点
一、原理
等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。
在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最终达到一个使其表面静电荷为0的区带，这时的pH则是该分子的pI，聚焦在等电点的分子也会不断扩散，一旦偏离其等电点后，由于pH环境的改变，分子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向pI迁移。因此，这些分子总会是处于不断扩散和抗扩散的平衡中，在pI处得以“聚焦”.
二、仪器与试剂
1．材料：蛋白样品
2．试剂：
聚丙烯酰胺、甲乙聚丙烯酰胺、两性电解质、尿素、NP-40、teiton-100
电极液：1M磷酸（阳极液）、1M氢氧化钠（阴极液）
固定液：100g三氯乙酸、10g磺基水杨酸溶于500ml，定容为1000ml
染色液：0.35g考马斯亮蓝R－150溶于300ml脱色液中，加热到60－70℃，加入0.3g硫酸铜。
脱色液：25％乙醇、8％冰乙酸溶于水
样品缓冲液:1％Ampholine 、2％Triton X-100、9M尿素
三、操作步骤：
1, 样品制备：
用IEF样品缓冲液提取待分析样品，如其他缓冲液提取的样品则应透析后，冷冻干燥、再复溶于IEF样品缓冲液。充分溶解后，离心去除不溶杂质。
2,制模具：
洗干净两块IEF专用玻璃板，进行硅化和反硅化处理，两块玻璃板的硅化和反硅化面相对，放上夹条，夹子夹好。
3, 配胶：
胶液组成：6ml胶母液（10％，19/1）
6－8％尿素
1ml Ampholine (pH3.5-10)
60-80ul 10%AP
5 ul TEMED
4, 灌胶：配好的胶迅速灌入模具
5, 电泳：
等胶凝固后，小心揭去上下玻璃板，将塑料垫片底部擦干，小心放于电泳槽上。在胶面两边各放一根浸透电极缓冲液的电极条。在胶面上任意位置上放上小擦镜纸片，在纸片上加样，盖上盖子，横功率25W电泳，约10min后，暂停电泳，取下纸片，继续电泳约30min，待电流达4mA以下，停止电泳。
6, 表面电极测定蛋白质的pI
7, 固定：取出塑料片，放入固定液中15min
8, 染色：取出塑料片放入染色液中65℃染色，直至条带出现
9, 可脱色至背景消除后干燥保存。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 两性电解质是等电聚焦的关键试剂，它的含量2﹪-3﹪较合适，能形成较好的pH梯度。
2、 丙烯酰胺最好是经过重结晶的。
3、 过硫酸铵一定要新配置。
4、 所有水用重蒸水。
5、 样品必须无离子，否则电泳时样品带可能走歪，拖带或根本不成带。
6、 平板等电聚焦电泳的胶很薄，当电流稳定在8mA，电压上升到550V 以上，由于阴极飘移，造成局部电流过大，胶承受不了而被烧断。
核酸技术
实验十 染色体DNA的提取
一、实验目的与原理
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
二、材料以方法
1、 材料：培养菌体
2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、 试剂：
细胞裂解液 100 mM Tris-HCl
5 mM EDTA
500 mM NaCl
1.25% SDS
PH 7.5
饱和酚，氯仿/异戊醇，酚/氯仿/异戊醇
无水乙醇，70％乙醇，异丙醇
3 M NaAc pH5.2, RNase，50×TE缓冲液，电泳载样缓冲液
三、操作步骤
（1） 培养菌体
（2） 加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇
（3） 12000－15000rpm离心15 min
（4） 取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min
（5） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（6） 加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min
（7） 12000－15000rpm离心10 min
（8） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（9） 加入2倍体积无水乙醇
（10） 12000－15000rpm离心10 min
（11） 倒弃液体留下沉淀，真空干燥
（12） 复溶于2 ml TE
（13） 加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min
（14） 加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min
（15） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（16） 加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min
（17） 12000－15000rpm离心10 min
（18） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（19） 真空干燥沉淀
（20） 复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。
（21） 电泳检测提取DNA的质量
四、结果与分析
点样空，若发亮则说明有污染
超螺旋结构DNA，若条带有拖尾则
说明有破碎的DNA
少量未清除的RNA
五、注意事项
1、 重点防止DNA的损伤，包括各种物理、化学和机械损伤。
2、 干燥好的染色体DNA最好溶于去离子水，以备后面直接利用。如果用TE 缓冲液溶解，后面还需去离子。
3、 取上清时，如果上清液过少，可再加入少量水，重新离心，取上清，避免DNA损失过多。
实验十一 质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理
质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方法为碱解法，质粒纯化方法为梯度离心法。
二、材料与试剂
1、材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2、仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、试剂：
Solution I 25 mM Tris-Hcl(pH7.4)
10 mM EDTA(pH8.0)
50 mM葡萄糖
高压灭菌，4℃保存
Solution II 0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用
Solution III 5 N KAc pH4.8
高压灭菌，4℃保存
3 M NaAc PH5.2, 高压灭菌，4℃保存。异丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），酚/氯仿，无水乙醇，70％乙醇，LB培养基，电泳试剂
三、操作步骤
1、细菌繁殖
LB培养基，2 ml/20ml，37℃，200rpm，摇一摇，过夜
2、离心10 min，5000 rpm, 4℃；弃上淸液
3、沉淀（菌体细胞）预冷的TES缓冲液洗涤，离心10 min，5000 rpm, 4℃
加入预冷的1 ml Solution I，冰浴，10 min
4、重新悬浮，加入150 ul溶菌酶母液，室温放置5 min
5、加入1.2 ml Solution II, 冰浴，5 min
6、加入0.9 ml预冷乙酸钾，混匀，离心10 min，12000 rpm, 4℃
7、加入1.5 ml异丙醇，-20℃冰箱内放置15 min
8、离心10 min，12000 rpm, 4℃
9、取沉淀，悬于400 ul TE缓冲液中
10、加入40 ul，3 M NaAc
11、酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀
12、离心10 min，12000 rpm, 4℃
13、取沉淀，冷冻干燥，再悬浮于50 ul TE缓冲液中。
14、电泳检测提取DNA的质量
三、结果与分析
超螺旋结构DNA
四、注意事项
在本实验中，如果不经过RNase处理，在电泳带中，RNA会呈现极亮的带，所以，建议使用RNase处理一下。离心时应注意转速不能太低，太低会导致质粒不纯；也不要太高，否则质粒不易溶解。电泳时应注意电压，电压太高或混有蛋白质杂质时电泳带容易产生偏离和拖尾。在DNA操作中应尽可能轻地操作（尤其是分别加入溶液Ⅱ、溶液Ⅲ轻轻摇），否则质粒容易断裂，从而在观察条带时出现许多杂带。无水乙醇可用于沉淀质粒，如果质粒量比较大的话，一般用异丙醇来沉淀。
实验十二 亚克隆技术
一、目的与原理
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR Ⅰ,Hind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作，掌握内切酶的实验操作技术。
二、材料与试剂
1．材料：λDNA
2．仪器：
离心机，恒温水浴，取液器，电泳仪，电泳槽，紫外观测仪
3．试剂
EcoRI及缓冲液，HindIII及缓冲液，λDNA,TAE缓冲液
三、操作步骤：
EcoRI、HindIII单酶切及部分酶切
取2只干净、灭菌新Eppendorf管，分别按下表加入
试剂 A（μl）
灭菌水 0
10×缓冲液 2
质粒 5
染色体DNA 12
EcoR I
1
HindIII
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后，分别加入0.5M（pH8.0）EDTA（使终浓度达到10mM）。加入6μl电泳加样缓冲液。
电泳。
EcoRI、HindIII双酶切
取1只干净、灭菌新Eppendorf管，按下表
加入试剂 体积（μl）
灭菌水 14
10×缓冲液 2
λDNA 2
EcoR I
1
HindIII
1
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后，分别加入0.5M（ pH7.2）EDTA（使终浓度达到10mM）。加入6μl电泳加样缓冲液。电泳分析。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 酶的量不超过总体积的1﹪，以为酶的保存液中含有甘油，甘油太多会形成星活性，切下非目的片段。
2、 在加入模板DNA以前可加入少量BSA，减轻管壁对酶的吸附作用。
3、 如果用双酶切，必须注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可以用同种缓冲液，则可同时水解，否则低盐浓度的限制酶必须先用，随着调节盐浓度，再用高盐浓度的限制酶水解。也可在第一个酶切反应完成后，用等体积酚/氯仿（1：1）抽提，加0.1倍体积的3mol/LnaAc和2倍体积的无水乙醇，混匀后-20℃放置30分钟，离心，干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
本实验的目的是对多酚氧化酶的纯化度鉴定及分子量的测定，通过实验，学习和掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质纯度和分子量的鉴定。
二、仪器与试剂
1．材料：
硫酸铵盐析沉淀的多酚氧化酶粗酶样品、DEAE-纤维素DE52柱层析的样品，Sephadex G-100柱层析的样品。
2．试剂：
（1）丙稀酰胺(Acr母液)：30％Acr （Acr/Bis）
（2）10％的SDS溶液
（3）10％的过硫酸铵溶液
（4）四甲基乙二胺（TEMED）
（5）分离胶缓冲液：1.5M Tris,PH8.8
（6）浓缩胶缓冲液：1.0M Tris,PH6.8
（7）电极缓冲液：10×30g Tris,125g 甘氨酸和5g SDS，加水溶解定容至1000ml,pH8.3
（8）样品缓冲液：0.2M Tris,PH6.8,1%SDS,30%甘油，巯基乙醇及溴酚兰
（9）染色液：0.15％考马斯亮蓝R250，溶于脱色液
（10）脱色液：50％的甲醇，7％的冰醋酸的水溶液
（11）标准分子量蛋白。
3．仪器设备：
电泳仪，垂直电泳槽等。
三、操作步骤
1, 凝胶制备：
用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。将配制好的分离胶溶液，倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。
2, 上样：
分别取样品若干ml于离心管中，按1/1-1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3－5min，取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30ul不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后，调节电泳仪电流到10mA（2－3mA/em），保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1－2cm时，即可停止电泳。
3, 染色：
电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 SDS与蛋白质的结合按质量成比例（即：1.4gSDS/g蛋白质），如果比例不当，就不能得到准确的数据。
2、 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。
3、 有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。
4、 有的蛋白质（如：电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质）不能采用该法测相对分子量。
5、 如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象，可能是SDS不纯引起。
实验八 Western bloting 技术
一、实验目的与原理
Western bloting技术是用来检测蛋白表达的特定的灵敏的方法，由蛋白质的SDS-PAGE、电转及杂交几部分组成。杂交技术主要有NC膜封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗和二抗的反应，显色等组成。将凝胶上的蛋白质转移到NC膜上，用其他蛋白作为封闭液，将膜上余下的其他蛋白结合位点封闭，加入与检测蛋白特异性的第一抗体，经免疫反应，一抗与靶蛋白结合，经洗膜液洗涤后，膜上仅在靶蛋白上结合抗体。在加入与第一抗体有免疫特异性的二抗，使之与一抗反应，反应后，经洗膜液洗涤，二抗仅存在于结合靶蛋白的一抗上。因为这种二抗都为酶标抗体，通过酶标反应，在显色液中，膜上结合靶蛋白—一抗—二抗的位置即将呈现一定的颜色。
二、材料与方法
1.材料
从微生物细胞中提取的多酚氧化酶（PPO）：10μl，20μl
NC膜：硝酸纤维素膜
2.仪器：
电转移槽，电泳仪，塑料封口机，摇床
3.试剂：
转移缓冲液：48Mm Tris,39mM甘氨酸，0.037%SDS同时加入20%乙醇。
封闭液与稀释液：PBS（牛血清白蛋白）
辣根过氧化物酶显色液：现配现用
三、操作步骤
1.SDS-PAGE电泳见上个实验
2.电转
⑴剪NC膜大小、滤纸与凝胶板一致，浸泡在转移缓冲液中5min。
⑵在转移装置中依次将三层滤纸、凝胶、滤纸、三层滤纸放在一起。
⑶将装好的转移装置放入电转移槽中NC膜一侧向正极，凝胶一面向负极。
⑷接通电源电压63V，电流90mA,转移过夜。
⑸转移结束后，取出装置，依次取掉各层，用铅笔在膜的上沿做标记，切下其中一个孔所对应膜的一半。
⑹NC膜的封闭：将NC膜放入一塑料袋中，加入封闭液3ml，封口，轻轻震荡2h。
⑺将封闭好的NC膜放入另一塑料袋中，加入用封闭液稀释的一抗，2.8ml，封口。4℃下轻摇2h。
⑻洗膜：弃去反应液，用一抗稀释液洗三次，每次10min。
将膜从PBS中取出转至150mM氯化钠，50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min。
⑼将二抗用二抗稀释液稀释，将NC膜放入塑料袋中，加入二抗溶液2.8ml。封口，轻轻震荡1h。
⑽洗膜：取出膜转至150mM氯化钠，50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min，三次。
⑾将膜放入显色液中，室温轻轻摇动，10min。
⑿待条带出现后，立刻用水洗膜，然后转入PBS中，观察记录。
实验九 等电聚焦电泳（IEF）分离蛋白及测定蛋白质等电点
一、原理
等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。
在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最终达到一个使其表面静电荷为0的区带，这时的pH则是该分子的pI，聚焦在等电点的分子也会不断扩散，一旦偏离其等电点后，由于pH环境的改变，分子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向pI迁移。因此，这些分子总会是处于不断扩散和抗扩散的平衡中，在pI处得以“聚焦”.
二、仪器与试剂
1．材料：蛋白样品
2．试剂：
聚丙烯酰胺、甲乙聚丙烯酰胺、两性电解质、尿素、NP-40、teiton-100
电极液：1M磷酸（阳极液）、1M氢氧化钠（阴极液）
固定液：100g三氯乙酸、10g磺基水杨酸溶于500ml，定容为1000ml
染色液：0.35g考马斯亮蓝R－150溶于300ml脱色液中，加热到60－70℃，加入0.3g硫酸铜。
脱色液：25％乙醇、8％冰乙酸溶于水
样品缓冲液:1％Ampholine 、2％Triton X-100、9M尿素
三、操作步骤：
1, 样品制备：
用IEF样品缓冲液提取待分析样品，如其他缓冲液提取的样品则应透析后，冷冻干燥、再复溶于IEF样品缓冲液。充分溶解后，离心去除不溶杂质。
2,制模具：
洗干净两块IEF专用玻璃板，进行硅化和反硅化处理，两块玻璃板的硅化和反硅化面相对，放上夹条，夹子夹好。
3, 配胶：
胶液组成：6ml胶母液（10％，19/1）
6－8％尿素
1ml Ampholine (pH3.5-10)
60-80ul 10%AP
5 ul TEMED
4, 灌胶：配好的胶迅速灌入模具
5, 电泳：
等胶凝固后，小心揭去上下玻璃板，将塑料垫片底部擦干，小心放于电泳槽上。在胶面两边各放一根浸透电极缓冲液的电极条。在胶面上任意位置上放上小擦镜纸片，在纸片上加样，盖上盖子，横功率25W电泳，约10min后，暂停电泳，取下纸片，继续电泳约30min，待电流达4mA以下，停止电泳。
6, 表面电极测定蛋白质的pI
7, 固定：取出塑料片，放入固定液中15min
8, 染色：取出塑料片放入染色液中65℃染色，直至条带出现
9, 可脱色至背景消除后干燥保存。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 两性电解质是等电聚焦的关键试剂，它的含量2﹪-3﹪较合适，能形成较好的pH梯度。
2、 丙烯酰胺最好是经过重结晶的。
3、 过硫酸铵一定要新配置。
4、 所有水用重蒸水。
5、 样品必须无离子，否则电泳时样品带可能走歪，拖带或根本不成带。
6、 平板等电聚焦电泳的胶很薄，当电流稳定在8mA，电压上升到550V 以上，由于阴极飘移，造成局部电流过大，胶承受不了而被烧断。
核酸技术
实验十 染色体DNA的提取
一、实验目的与原理
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
二、材料以方法
1、 材料：培养菌体
2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、 试剂：
细胞裂解液 100 mM Tris-HCl
5 mM EDTA
500 mM NaCl
1.25% SDS
PH 7.5
饱和酚，氯仿/异戊醇，酚/氯仿/异戊醇
无水乙醇，70％乙醇，异丙醇
3 M NaAc pH5.2, RNase，50×TE缓冲液，电泳载样缓冲液
三、操作步骤
（1） 培养菌体
（2） 加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇
（3） 12000－15000rpm离心15 min
（4） 取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min
（5） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（6） 加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min
（7） 12000－15000rpm离心10 min
（8） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（9） 加入2倍体积无水乙醇
（10） 12000－15000rpm离心10 min
（11） 倒弃液体留下沉淀，真空干燥
（12） 复溶于2 ml TE
（13） 加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min
（14） 加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min
（15） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（16） 加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min
（17） 12000－15000rpm离心10 min
（18） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（19） 真空干燥沉淀
（20） 复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。
（21） 电泳检测提取DNA的质量
四、结果与分析
点样空，若发亮则说明有污染
超螺旋结构DNA，若条带有拖尾则
说明有破碎的DNA
少量未清除的RNA
五、注意事项
1、 重点防止DNA的损伤，包括各种物理、化学和机械损伤。
2、 干燥好的染色体DNA最好溶于去离子水，以备后面直接利用。如果用TE 缓冲液溶解，后面还需去离子。
3、 取上清时，如果上清液过少，可再加入少量水，重新离心，取上清，避免DNA损失过多。
实验十一 质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理
质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方法为碱解法，质粒纯化方法为梯度离心法。
二、材料与试剂
1、材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2、仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、试剂：
Solution I 25 mM Tris-Hcl(pH7.4)
10 mM EDTA(pH8.0)
50 mM葡萄糖
高压灭菌，4℃保存
Solution II 0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用
Solution III 5 N KAc pH4.8
高压灭菌，4℃保存
3 M NaAc PH5.2, 高压灭菌，4℃保存。异丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），酚/氯仿，无水乙醇，70％乙醇，LB培养基，电泳试剂
三、操作步骤
1、细菌繁殖
LB培养基，2 ml/20ml，37℃，200rpm，摇一摇，过夜
2、离心10 min，5000 rpm, 4℃；弃上淸液
3、沉淀（菌体细胞）预冷的TES缓冲液洗涤，离心10 min，5000 rpm, 4℃
加入预冷的1 ml Solution I，冰浴，10 min
4、重新悬浮，加入150 ul溶菌酶母液，室温放置5 min
5、加入1.2 ml Solution II, 冰浴，5 min
6、加入0.9 ml预冷乙酸钾，混匀，离心10 min，12000 rpm, 4℃
7、加入1.5 ml异丙醇，-20℃冰箱内放置15 min
8、离心10 min，12000 rpm, 4℃
9、取沉淀，悬于400 ul TE缓冲液中
10、加入40 ul，3 M NaAc
11、酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀
12、离心10 min，12000 rpm, 4℃
13、取沉淀，冷冻干燥，再悬浮于50 ul TE缓冲液中。
14、电泳检测提取DNA的质量
三、结果与分析
超螺旋结构DNA
四、注意事项
在本实验中，如果不经过RNase处理，在电泳带中，RNA会呈现极亮的带，所以，建议使用RNase处理一下。离心时应注意转速不能太低，太低会导致质粒不纯；也不要太高，否则质粒不易溶解。电泳时应注意电压，电压太高或混有蛋白质杂质时电泳带容易产生偏离和拖尾。在DNA操作中应尽可能轻地操作（尤其是分别加入溶液Ⅱ、溶液Ⅲ轻轻摇），否则质粒容易断裂，从而在观察条带时出现许多杂带。无水乙醇可用于沉淀质粒，如果质粒量比较大的话，一般用异丙醇来沉淀。
实验十二 亚克隆技术
一、目的与原理
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR Ⅰ,Hind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作，掌握内切酶的实验操作技术。
二、材料与试剂
1．材料：λDNA
2．仪器：
离心机，恒温水浴，取液器，电泳仪，电泳槽，紫外观测仪
3．试剂
EcoRI及缓冲液，HindIII及缓冲液，λDNA,TAE缓冲液
三、操作步骤：
EcoRI、HindIII单酶切及部分酶切
取2只干净、灭菌新Eppendorf管，分别按下表加入
试剂 A（μl）
灭菌水 0
10×缓冲液 2
质粒 5
染色体DNA 12
EcoR I
1
HindIII
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后，分别加入0.5M（pH8.0）EDTA（使终浓度达到10mM）。加入6μl电泳加样缓冲液。
电泳。
EcoRI、HindIII双酶切
取1只干净、灭菌新Eppendorf管，按下表
加入试剂 体积（μl）
灭菌水 14
10×缓冲液 2
λDNA 2
EcoR I
1
HindIII
1
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后，分别加入0.5M（ pH7.2）EDTA（使终浓度达到10mM）。加入6μl电泳加样缓冲液。电泳分析。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 酶的量不超过总体积的1﹪，以为酶的保存液中含有甘油，甘油太多会形成星活性，切下非目的片段。
2、 在加入模板DNA以前可加入少量BSA，减轻管壁对酶的吸附作用。
3、 如果用双酶切，必须注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可以用同种缓冲液，则可同时水解，否则低盐浓度的限制酶必须先用，随着调节盐浓度，再用高盐浓度的限制酶水解。也可在第一个酶切反应完成后，用等体积酚/氯仿（1：1）抽提，加0.1倍体积的3mol/LnaAc和2倍体积的无水乙醇，混匀后-20℃放置30分钟，离心，干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。
上海金畔生物代理品牌产品及货期
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货期 |
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3-4周 |
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Fortis旨在为HPLC市场提供创新的产品，提供的填料范围广，从UPLC1.7um到10um。产品包括：UPLC，RP、NP、HILIC等色谱柱。 |
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BioVendor Laboratory Medicine, Inc. 是欧洲的一家医药科技公司，专注于为分子和细胞学实验室提供体外研究产品，主要产品有重组蛋白、抗体和ELISA试剂盒。目前公司致力于有关激素和细胞活素利用方面的研究，产品相关方向：能量代谢和体重调节；骨代谢；心血管疾病和肾病；感染和发炎；铁代谢研究；肌肉生长控制；神经组织损坏标记；肿瘤学；胰腺调节分子；分泌型磷脂酶A2等。 |
3-4周 |
| 2、生化试剂 | |||
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Hampton |
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美国Hampton公司是蛋白质晶体研究方面的专家，为广大研究人员提供了极大的方便，促进了蛋白质晶体的研究，为世界范围内的蛋白质晶体研究人员所信赖。 |
4周 |
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爱尔兰Megazyme公司提供超过70种诊断试剂盒和超过300种其他试剂和底物用于检测谷物，食品，饲料，发酵，乳制品和葡萄酒行业。其中欧洲检测果汁及葡萄酒等发酵产品基本都采用该公司产品。 |
2-3周 |
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AAT Bioquest提供反应荧光探针和发光探针、生物素和端粒酶能、荧光和发光探针、新型荧光和发光探针、提供生理和神经探针,特别是钙离子指示剂和膜电位探针。 |
3-4周 |
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Epigentek |
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Epigentek提供DNA修饰试剂盒、染色质免疫沉淀反应试剂盒、非放射性DNA/组蛋白转甲基酶激活抑制试剂盒、DNA-蛋白交联试剂盒、位点特异的组蛋白甲基化试剂盒、表形相关的抗体等。 |
3-4周 |
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Worthington |
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美国Worthington是世界上最重要的酶类供应商，酶类产品主要是胶原酶类，胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，弹性蛋白酶，和脱氧核糖核酸酶。 |
3-4周 |
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Cayman |
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Cayman公司可以提供2，138 多种生化和免疫试剂，涉及肿瘤、氧化氮、神经学、凋亡、氧化性损伤、内分泌学等研究领域。 |
3-4周 |
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Millipore有3个业务部门组成：实验室解决方案部，生物科学部和过程方案部。 |
4-6周 |
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Anaspec |
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AnaSpec公司提供专业知识肽，检测试剂，抗体检测试剂盒，寡核苷酸和qPCRs。AnaSpec还提供一流的定制服务，包括多肽合成，抗体生产，研发分析，寡核苷酸合成。 |
3-4周 |
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MP BIO |
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美国MP Biomedicals公司提供：DNA/RNA分离和纯化试剂盒、核酸抽提仪器、腺病毒载体、FISH探针、PCR相关试剂、即用型培养基、基因表达和分析研究试剂盒、转染试剂、限制性内切酶、电泳和杂交试剂等。 |
3-4周 |
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Active Motif |
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美国Active Motif公司是世界上最大的转录因子研究试剂生产商。为全球从事基因功能研究、基因表达调控及其编码蛋白研究的科研人员，提供高质量的产品和优质的服务。 |
3-4周 |
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Innova Biosciences |
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Innova Biosciences 公司专注于生物偶联技术（bioconjugation）–即将两种分子结合在一起形成一个杂合结合物（hybrid conjugate）。Innova提供“一步法”抗体标记试剂盒-Lightning-Link™系列产品极大程度的简化了结合标记流程。 |
3-4周 |
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Sartorius |
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赛多利斯生物技术部门专注于过滤、液体管理、发酵和细胞培养、纯化以及实验室应用。 |
6-8周 |
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LKT Labs |
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美国LKT Labs主要提供：癌症药物、药物发现试剂盒、天然产物、广泛的生命科学研究试剂、定制合成。在LKT Labs 可以找到在其他地方找不到的产品。 |
2-3周 |
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Mirusbio |
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Mirus以“非病毒（如基于质粒DNA）基因转移方法比利用病毒来转移基因具有明显的优势”为理念而建立。是核酸研究试剂开发的领跑者，其许多杰出成就受到世界公认。 |
4周左右 |
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Cygnus |
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Cygnus生物公司是一家专为疫苗生产企业、基因工程药企、研发部门及QA部门提供污染物检测产品的世界著名的美国公司。 |
3-4周 |
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BioVision公司提供用于检测早、中、晚期凋亡的试剂，可以检测凋亡发生的不同区域，包括：线粒体、胞浆、胞膜及胞核。研究趋势有细胞凋亡、细胞增殖、细胞损伤与压力、细胞信号、细胞分馏、胆固醇及肥胖、代谢、分子生物学。 |
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ENZO |
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ENZO为生命科学研究者提供基因组分析，细胞生物学，翻译后修饰，信号转导，肿瘤和免疫学，药物筛选等相关领域的优质产品。 |
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Avanti |
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美国Avanti主要为各种制药厂和研究机构提供从毫克级到公斤级乃至百公斤级的磷脂类和甾体类中间体和试剂。 |
4周左右 |
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Larodan |
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瑞典Larodan是一家专业生产天然酯类生化试剂的公司，主要包括胆酸及甲酯、胆固醇及酯、辅酶A及酰基辅酶A、共轭亚油酸、二元酸及酯、支链/直链脂肪酸甲酯、标记物、神经节苷酯、甘油酯、磷脂等3000多种。 |
2-3周 |
| 4、抗体 | |||
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公司品牌 |
Logo |
相关产品 |
货期 |
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GeneTex |
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美国GeneTex公司提供癌症研究相关抗体。目前抗体总数已逾45，000种，且每月推出近400种新抗体。其中，兔多抗和鼠单抗为其优势产品。 |
3-4周 |
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Agrisera |
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瑞典Agrisera公司致力于植物/环境科学研究中所需蛋白抗体研发与销售，主要集中于模式之物及其他植物的生理、病理相关的蛋白抗体。Agrisera的所有抗体分两大类：植物及藻类的抗体，以及细菌、真菌、昆虫、鱼等动物类抗体，植物领域的抗体。 |
3-4周 |
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ProSpec |
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ProSpec可以提供细胞因子，生长因子，激素，信号蛋白，病毒抗原等近800种重组蛋白和100多种抗体。绝大部分产品是天然成熟型蛋白，而不含有标签蛋白。 |
3-4周 |
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AbD Serotec |
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英国Serotec公司可以提供上万种抗体和免疫学试剂、单抗制备和多种规模的抗体生产和标记服务。主要产品系：Human CD、Rodent、Veterinary、Cell biology and Apoptosis、Flow Cytometry、Immunohistology、Secondary Reagents；其中大鼠抗体和各种动物研究试剂，Serotec在全世界处于领先地位。 |
3-4周 |
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eBioscience |
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美国ebioscience专注在人和小鼠的CD系列/细胞因子相关试剂流式抗体.大部分产品的克隆号与PMG一样，产品种类丰富：包括人、小鼠和大鼠的免疫学相关试剂。 |
3-4周 |
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KPL |
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KPL是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上最大的二抗和底物显色系统生产商。产品有：亲和纯化的二抗、ELISA底物及试剂盒，蛋白检测和纯化试剂盒，核酸标记和检测等试剂，金标记、生物素标记、细菌抗体等。 |
大部分有现货 |
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CST |
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美国CST是提供特色的信号转导检测用抗体及磷酸化抗体，ELISA试剂盒，激酶等产品。 |
3-4周 |
| 5、校准及分析标准品 | |||
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公司品牌 |
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相关产品 |
货期 |
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USP |
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美国药典是美国政府对药品质量标准和检定方法作出的技术规定，也是药品生产、使用、管理、检验的法律依据。NF收载了美国药典（USP）尚未收入的新药和新制剂。 |
3-4周 |
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EP |
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《欧洲药典》为欧洲药品质量检测的唯一指导文献。所有药品和药用底物的生产厂家在欧洲范围内推销和使用的过程中，必须遵循《欧洲药典》的质量标准。 |
3-4周 |
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BP |
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英国药典是英国药品委员会正式出版的英国官方医学标准集，是英国制药标准的重要出处，也是药品质量控制、药品生产许可证管理的重要依据。 |
3-4周 |
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NIST |
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美国国家标准局（NIST）制定的“标准参照样品（SRM）”，共有1100多种，每种标样都有美国国家标准局的详细分析报告和用途说明。 |
3-4周 |
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LGC |
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LGC是Laboratory of the Government Chemist的简称，中文名英国政府化学家实验室，是化学和生物计量、法医、诊断科学服务及标准物质方面的市场领导者。 |
3-4周 |
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TRC |
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加拿大TRC公司是一家专业生产药品、药品代谢物、物质同位素标记物、药物杂质等分析标准品的公司 |
3-4周 |
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TLC |
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加拿大TLC标准品, TLC是独立的服务公司，专业定制合成复杂的有机化学物质对生物医学和制药研究 |
3-4周 |
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DR |
德国Dr.Ehrenstorfer公司是欧洲提供环境标准品的主要公司之一。具有超过40年的生产历史，现在可以提供超过5,000种的化学标准品 |
3-4周 |
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Chiron |
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挪威Chiron标准品，CHIRON 公司是挪威的一家20年历史的稳定性同位素供应商。 |
3-4周 |
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ChromaDex |
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ChromaDex公司的产品主要包括：化合物对照品、植物化学对照品、试剂盒 ;美国草药药典标准品。 |
3-4周 |
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ChemService |
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通过美国实验室证学会认证，生产化学标准品的专业厂商。 |
3-4周 |
| 6、糖生物学 | |||
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公司品牌 |
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相关产品 |
货期 |
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TdB |
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TdB公司提供葡聚糖、硫酸葡聚糖、葡聚糖衍生物：DEAE-葡聚糖、CM-葡聚糖、Q-葡聚糖、苯基葡聚糖等、FITC标记葡聚糖、FITC标记菊糖、TRITC-标记葡聚糖、蓝色葡聚糖等 |
2-3周 |
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Iduron |
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英国Iduron是专业从事糖胺生产和销售的公司，为从事科研及产品开发提供独特和优质的GAGs产品. |
3-4周 |
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Elicityl |
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法国的Elicity公司提供200多种多糖和寡糖。其中的60多种低聚糖有众多不同领域的应用潜力，如防癌疫苗，抗感染，抗神经退化，诊断或功能性食品等。 |
3-4周 |
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DEXTRA |
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英国Dextra公司提供研究用糖库，主要用来探索功能糖和筛选酶抑制剂。 |
3-4周 |
| 7、微生物和细胞组织培养 | |||
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公司品牌 |
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相关产品 |
货期 |
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Nissui |
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Nissui提供全面的食品工业，诊断工业生产和研究用培养基，包括细胞培养基、微生物培养基、致密固体培养基Compact Dry等。 |
4周 |
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Phytotech |
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美国PhytoTechnology是一家专门从事于研发和生产植物组织培养基，已经成为了世界上著名的植物生物学类产品的生厂商和原料供应商。 |
4周左右 |
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Gibco |
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Gibco提供DMEM，MEM，RPMI1640等液体及粉末细胞培养基，无血清培养基和专用培养基，各种种属的优质动物血清，氨基酸，抗生素，生长因子等细胞培养添加剂，昆虫细胞以及293等哺乳动物细胞。 |
现货1周 |
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Hyclone |
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HyClone公司提供高品质胎牛血清（FBS）及其他血清产品、各类经典的细胞培养基、无血清和无蛋白培养基， | |
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3M |
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3M 公司提供微生物检测产品主要应用于食品、饮料及相关行业的微生物检测，在全球食品检测领域均有广泛的使用。 |
期货4周 |
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OXOID |
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Oxoid公司提供培养基、微生物培养、诊断试剂、生化鉴定、药敏纸锭。产品范围阔及与疾病、微生物诊断相关的临床检验科学、基础学术研究与工业生产领域。 |
期货：6-8周 |
| 8、聚合物类 | |||
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公司品牌 |
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相关产品 |
货期 |
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LaysanBio |
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美国Laysan Bio提供PEG试剂用于7个FDA或欧盟批准的药品或医疗器械，包括Neulasta®， Somavert®， PEGASYS®， PEG-INTRON®， Definity®， Macugen® and DuraSeal™。 |
3-4周 |
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Polymer source |
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加拿大Polymer Soruce主要提供：A.稳定的氘代聚合物；B.特种聚合物；C.特种单体和齐聚物；D.高纯化学试剂等。 |
3-4周 |
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Polymer factory |
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瑞典Polymerfactory致力于聚合物研究，产品线包括：Dendrimers 树枝状聚合物、树突聚合物、超支化聚合物、树枝状多功能PEGS、质谱标准品等。 |
3-4周 |
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Scientific Polymer |
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美国Scientific Polymer提供广泛的产品：单体&增塑剂、增塑剂套装、色谱柱、除对苯二酚和甲醚对苯二酚柱、除t-丁基邻苯二酚柱、聚合物标准品、离子交换树脂、聚合物套装和根据客户需要定制产品。 |
3-4周 |
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Rapp Polymers |
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德国Rapp Polymers提供创新性的先进的树脂，使TentaGel树脂商业化。随后研发生产出PEG衍生物。为固相合成（SPS）提供广泛地高质量的树脂及广泛地聚乙二醇衍生物（PEG）。 |
3-4周 |
| 9、耗材类 | |||
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公司品牌 |
Logo |
相关产品 |
货期 |
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Agilent |
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安捷伦科技有限公司是世界最大的测试测量公司，是全球电子测量、生命科学与化学分析的领导者。 |
货期视库存定 |
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NUNC耗材 |
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NUNC致力于为世界各国的科研人员提供顶级的一次性塑料实验器具。其中，细胞培养系列产品，酶标系列产品，细胞工厂系列产品，以及冷冻保藏系列产品等已经成为生命科学用户的首选。 |
现货10天 |
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Rainin |
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RAININ（瑞宁）提供移液器及耗材。 |
现货3天 |
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ISOLAB |
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德国ISOLAB提供实验室耗材设备，包括玻璃器具、色层分析、微生物学、分析检测用耗材仪器、安全设备等。 |
4-6周 |
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Labnet |
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美国Labnet公司主要产品有离心机、移液器、烘箱、培养箱、三维脱色摇床，电泳仪，凝胶成像系统等，产品畅销欧美各国。 |
大部分现货 |
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Axygen |
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美国Axygen公司主要产品为实验室耗材，包括：吸头、PCR薄壁管、PCR板、PCR封口膜、离心管、离心管架和分离柱。 |
常用现货 |
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Corning |
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Corning公司是凭借在光学、材料科学、特殊表面和生物方面等多专业领域内的丰富积累，康宁的一系列革命性解决方案，提高制药业产能，并使突破性发现成为可能。 |
可查库存 |
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Brand |
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德国BRAND生产制造最广泛的的移液操作产品线，诸如分液器Dispensette® 与移液器Transferpette® 以及相关的BRAND耗材满足生命科学实验领域的广泛应用需求。 |
1-2周 |
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Wheaton |
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Wheaton产品包括玻璃和塾料容器、细胞培养产品、色谱产品及其它实验室用玻璃仪器。 |
3个月 |
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Greiner bio-one |
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德国Greiner是著名的耗材供应商，主要产品包括细胞培养产品、检测微孔板、微生物培养皿、培养管及巴氏吸管等。 |
3个月 |
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VP |
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VP提供湿热高压灭菌、Eto(环氧乙烷)灭菌、干热灭菌和辐射灭菌包装袋，测试灭菌器性能的BD测试包，灭菌指示带等。 | |
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地 址： 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编： 201208
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TRC品牌代理商
TRC品牌代理商–上海金畔
1. TRC品牌介绍
TRC是加拿大全资公司，世界领先的有机化学品（包括碳水化学、芳香化学、氮磷硫化学、放射性同位素及同位素标记物等）制造商，建立于1982年，占地55,000平方英尺，包括研究实验室和
生产车间，主要用于生物学、医学、药学、临床诊断和试验方面的研究和生产。TRC提供生化研究的有机化学品，用于生物技术，制药，诊断。研究特殊化学品。提供从g级到kg级别的定制合
同。
2. TRC重点产品
有机化学品标准品
3. TRC官网
http://www.trc-canada.com/
4. 金畔生物代理TRC品牌联系方式
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Lonza品牌代理商
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1. Lonza品牌介绍
Lonza（龙沙）：瑞士的制药化工巨头，龙沙集团是一家以生命科学为主导，在生物化学、
精细化工、功能化学等行业均处于领先地位的全球性跨国公司。具有一百多年历史，总部位
于瑞士巴塞尔，在欧洲、美洲、亚洲总共有35个研发和生产中心，其中LONZA的大部分生物
技术产品在美国研发生产。LONZA(龙沙)主要生产生命科学产品以及多种类的精细和特殊化
工产品，以高科技生物技术与优质产品闻名世界。生命科学产品线包括细胞生物学，分子生
物学，生物检测和内毒素检测试剂。
2. Lonza重点产品
细胞生物学，分子生物学，生物检测和内毒素检测试剂
3. Lonza官网
http://bio.lonza.com/200.html
4. 金畔生物代理Lonza品牌联系方式
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1. Lonza品牌介绍
Lonza（龙沙）：瑞士的制药化工巨头，龙沙集团是一家以生命科学为主导，在生物化学、
精细化工、功能化学等行业均处于领先地位的全球性跨国公司。具有一百多年历史，总部位
于瑞士巴塞尔，在欧洲、美洲、亚洲总共有35个研发和生产中心，其中LONZA的大部分生物
技术产品在美国研发生产。LONZA(龙沙)主要生产生命科学产品以及多种类的精细和特殊化
工产品，以高科技生物技术与优质产品闻名世界。生命科学产品线包括细胞生物学，分子生
物学，生物检测和内毒素检测试剂。
2. Lonza重点产品
细胞生物学，分子生物学，生物检测和内毒素检测试剂
3. Lonza官网
http://bio.lonza.com/200.html
4. 金畔生物代理Lonza品牌联系方式
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HTL品牌代理商
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1. HTL品牌介绍
波兰High Tech Lab公司生产高质量实验及临床仪器、耗材产品。该公司由两部分组成：位于Warsaw的PZ HTL S.A.生产精密测量产品；位于Ozorkow的HTL-STREFA Sp.zo.o.生产实验室耗
材及外科刀具。HTL产品通过了ISO9001质量体系认证，其中HTL Strefa Sp.zo.o.生产的医学产品符合欧盟Directive 93/42/EEC标准、并携带有CE标志，为美国食品与药物管理局(FDA)注册产
品。
HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验，是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂，HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长，成为世界具有世界顶级品质的产品。
DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
2. HTL重点产品
HTL有20多年的精密移液器设计、生产经验，是世界上20多个品牌的移液器OEM工厂，HTL自有品牌的移液器更是在自己独有的制造水平之上博采众长，成为世界具有世界顶级品质的产品。
DISCOVERY系列移液器更是集HTL公司20多年制造经验之精华的扛鼎之作。
3. HTL官网
http://www.htl.com.pl/
4. 金畔生物代理HTL品牌联系方式
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订货热线：15221999938
网 址： www.jinpanbio.com
Email：sales@jinpanbio.com
Hampton品牌代理商
Hampton品牌代理商–上海金畔
1. Hampton品牌介绍
美国Hampton Research公司是蛋白质晶体研究方面的专家，其提供的试剂长期以来在该领域居于领先地位，为广大研究人员提供了极大的方便，促进了蛋白质晶体的研究，为世界范围内的蛋
白质晶体研究人员所信赖。
2. Hampton重点产品
蛋白质晶体
仪器耗材
3. Hampton官网
http://hamptonresearch.com/
4. 金畔生物代理Hampton品牌联系方式
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Fortis品牌代理商
Fortis品牌代理商–上海金畔
Fortis品牌介绍
Fortis公司于2005年成立，以柴郡为基地，来自有丰富的色谱开发及创新历史的爱尔兰西北部。Fortis旨在为HPLC市场提供创新的产品。Fortis致力于研发及生产最新的HPLC和UPLC色谱柱，
满足和超过客户需求的产品，为客户提供高标准的服务和支持。其提供的填料范围广，从UPLC1.7um到10um。产品包括：UPLC，RP、NP、HILIC 色谱柱。Fortis提供的色谱柱优化色谱分离的峰
形、柱效、稳定性和再现性。
1. Fortis重点产品
产品包括：UPLC，RP、NP、HILIC 色谱柱。Fortis提供的色谱柱优化色谱分离的峰形、柱效、稳定性和再现性。
3. Fortis官网
4. 金畔生物代理Thermo Fisher Scientific品牌联系方式
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ENZO品牌代理商
ENZO品牌代理商–上海金畔
1. ENZO品牌介绍
ENZO旗下共有Enzo，Biomol，Alexis Biochemicals，Assay Designs/Stressgen等品牌，为生命科学研究者提供基因组分析，细胞生物学，翻译后修饰，信号转导，肿瘤和免疫学，药物筛选
等相关领域的优质产品
Enzo life sciences 的标记技术和检测技术在科学研究和临床诊断这两个领域中处于领先地位。标记探针和染料的强强组合是基因表达分析，核酸检测，蛋白质生物化学研究与检测，分子生
物学，细胞分析等研究领域中目标识别/验证和高容量分析实验的强有力工具。
2. ENZO重点产品
ENZO life sciences 主要产品：
Microarray Analysis(生物芯片分析类产品)
Modified Nucleotides（带修饰的核苷）
Nucleic Acid Labeling Systems（核苷酸标记系统）
Monoclonal Antibodies（带修饰的抗体）
Human Papillomavirus Identification Systems(人乳头状瘤识别系统)
In Situ Hybridization And Detection Systems（原位杂交和检测系统）
BioProbe® Labeled Probes（生物标记探针）
Signal Generating Systems（信号发生系统）
3. ENZO官网
http://www.enzolifesciences.cn.com/
4. 金畔生物代理ENZO品牌联系方式
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Corning品牌代理商
Corning品牌代理商–上海金畔
1. Corning品牌介绍
康宁公司是在生命科学实验室产品方面拥有90多年历史的全球领先开发商、制造商和供应商，对于药物研发过程中提高效率、降低成本、节约时间等方面有着突出贡献，成为众多科研人员最
为信赖的实验室伙伴。凭借在光学、材料科学、特殊表面和生物方面等多专业领域内的丰富积累，康宁的一系列革命性解决方案，提高制药业产能，并使突破性发现成为可能。
除了在生命科学研究领域作为玻璃耗材和塑料实验室用品供应的全球领导者，康宁还致力于不断研发和制造生命科学的其他产品，有康宁 Epic® 系统用于无标记探测，HYPERFlask® 细
胞培养瓶用于大规模细胞培养，新型表面如超低吸附表面和CellBIND® 表面，提高化验精度。我们仍持续满足客户独特的需求和不断变化的需求。
2. Corning重点产品
实验室耗材
培养基
3. Corning官网
http://www.corning.com
4. 金畔生物代理Corning品牌联系方式
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