D5-氨基甲酸乙酯 标准品 2015年国标法

上海金金畔生物科技有限公司提供D5-氨基甲酸乙酯 标准品 2015年国标法
【事件背景】氨基甲酸乙酯是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物，可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。氨基甲酸乙酯过去曾用于人类医药用途，但因为含有毒性且疗效欠佳，现已禁用。不同的酒精饮品检出的氨基甲酸乙酯含量不一。 例如烈酒（特别是由樱桃、杏和梅等核果制造的烈酒）的含量一般较高，而啤酒的含量则偏低。不同种类的酒精饮品的氨基甲酸乙酯含量差异很大。由于氨基甲酸乙酯含基因毒性，小鼠长期口服此类物质会产生各种癌瘤。2007年，世界卫生组织的国际癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。 2009年开始，已经有题为《固相萃取一气相色谱法测定葡萄酒中的氨基甲酸乙酯》的论文出版公示，自此酒精饮品中氨基甲酸乙酯的测定为民众关注。2012年，随着白酒中塑化剂事件愈演愈烈，酒精饮品和发酵物品中氨基甲酸乙酯检测问题再一次被提上日程。
【国标出台】 2015年初，《食品安全国家标准 食品中氨基甲酸乙酯的测定》（GB 5009.223-2014）公布，其规定了啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯含量的气相色谱-质谱法测定。标准适用于啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯含量的测定。此标准为强制标准，即具有法律属性，在一定范围内通过法律、行政法规等手段强制执行的标准。
自此，致癌物-氨基甲酸乙酯的含量和检测，成为酒精饮品和发酵食品相关企业、机构、检验检测机构不得不说的“秘密”！在国家强制标准验证阶段，我们已经开发并优化了符合国家标准方法的碱性硅藻土柱，推出成熟的商品化产品Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土），适逢2015年新版国标出台，此产品完美贴合此项标准！
GB 5009.223-2014标准中提到的“碱性硅藻土固相萃取柱” 并未提到填料处理方法，客户盲目寻找柱子，未必符合国家标准！博纳艾杰尔经过大量标准验证，确保Cleanert EC柱（订货号：EC200012）结合国标产品进行白酒中氨基甲酸乙酯测定，检出限为2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～ 104.5%，完全满足食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求。（具体检测方法见下文） ！
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酒中氨基甲酸乙酯的测定
MF00013
方法一、GC-MS 法 参照GB 5009.223-2014
摘要：本文参照食品安全国家标准方法《GB 5009.223-2003 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 ，进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）进行样品前处理，GC-MS法测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0 μg / kg（取样2.00g），回收率在98.3%～104.5%；白酒样品的日间精密度测试，RSD<3%。方法简单，产品稳定，结果准确灵敏，完全满足分析检测的要求。
氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一种致癌物，可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。它是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物。2007年，世界卫生组织的国际癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的。
一、试剂和材料
标准溶液配制
1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL。
2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL。
1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.5000 g氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL。
分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准，加100 μL 2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL，得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的标准使用液（内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）
固相萃取柱：Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）
气相色谱柱：DA-INNOWAX柱
二、实验方法
样品前处理
准确量取 2.00 ml 酒样（注：啤酒样品EC含量较低，取4 mL样品上样），加 100 μL 2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠 0.3 g（白酒、酱油不加），超声溶解、混匀，然后加样到氨基甲酸乙酯上，抽真空，让试样慢慢渗入到Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱中，静置约 10 min，先用 10 mL 正己烷淋洗除杂，然后用 15 mL 5%乙酸乙酯/乙醚溶液以1 mL/min 流速洗脱并收集于10 mL 具塞刻度试管中，在室温下用氮气缓缓吹至0.5mL 左右，用甲醇定容至1.0 mL 制成测定液供GC/MS分析，同时做空白。
GC-MS条件
色谱柱：DA-INNOWAX柱，30 m*0.25 mm*0.25 μm；
进样口温度：220℃；柱温：初温 50℃，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min；
载气：氦气，纯度≥99.999％
流速：1 mL/min；
电离方式：EI源。
离子源温度：230℃；
进样方式：不分流进样；
样量：1-2μL；
氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）： 62、76、89；定量离子62；
D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）64、76；定量离子64
三、实验结果
色谱图

图1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图

图2 氨基甲酸乙酯质谱图

3 内标 D5-氨基甲酸乙酯质谱图
标准曲线

酒样加标的回收率及精密度

方法检出限
当试样取2.00g时，本方法氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0μg/kg。
四、结论
本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相柱（碱性硅藻土）前处理结合DA-INNOWAX柱进行白酒中氨基甲酸乙酯的测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～ 104.5%，完全满足食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求。
五、订货信息

方法二、液相方法-荧光检测法
一、原理
在盐酸中，氨基甲酸乙酯与9-羟基吨反应，生成具有荧光特性的衍生物，经色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量

二、衍生方法
量取0.02mol/L的9-羟基吨500μL添加到1ml酒精度调整至40%的样品或标样中，然后加入100μL的1.5mol/L HCl中，混匀使反应完全，放暗处衍生至少60min，过0.45μm滤膜，待测。
三、样品前处理方法：同上
四、色谱条件
色谱柱：Venusil MP C18，4.6 mm*250 mm，5 μm（P/N：VA952505-0）
流速：0.8 mL/min
柱温：30℃
激发波长：233 nm
发射波长：600 nm
流动相：A：0.02M乙酸钠（pH=7.2），B：乙腈，梯度程序如下

注意事项：
衍生试剂配置完成后，应4℃避光保存（有效期1个月）
在加样时，尽量缩短操作时间，避免衍生试剂见光时间过长分解
该衍生反应需要在暗处进行
衍生时间不得少于30min
流动相pH值要调整准确
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